荧光染料也称DNA结合染料，SYBR Green 是一种结合于一切DNA双螺旋小沟区域的具有绿色激起波长的染料。游离的SYBR Green基本上没有荧光信号，但结合双链DNA后，其荧光信号可呈数百倍的添加。随PCR产品的添加，PCR产品与染料的结合量也增大，其荧光信号强度代表双链DNA分子的数量。

  PCR扩增时，探针一般先于引物结合到意图基因序列上，结合位点坐落其间一个引物结合位点的下流。跟着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5外切酶活性，探针产生水解，荧光基团和淬灭基团进行别离，然后增强了荧光基团的信号。每通过一个PCR循环，就会有更多的荧光基因从探针上脱离，荧光强度会跟着PCR产品的添加而添加。因而，依据PCR反响体系中的荧光强度即可得出初始DNA模板的数量。

  一切的实时荧光定量PCR体系都有三个一起的组成部分：温控体系，光源体系和检测体系。温控体系用于PCR扩增，履行高温变性，低温退火和中温延伸的过程；光源体系用于激起荧光染料或荧光基团，使其宣布信号；检测体系收集荧光信号。温控体系每完结一个循环，光源和检测体系则先后进行激起和收集，然后实时记载每一个循环荧光信号的改变。跟着PCR反响的进行，产品逐步堆集，荧光信号逐步增强。

  实时荧光定量PCR体系所监测到的一切循环的荧光信号能够绘制成一条曲线，即为荧光扩增曲线。扩增曲线大体上分为基线期、指数期、线性期和渠道期。指数期内，每个循环PCR产品量大约添加1倍（假定100%反响功率），该阶段的扩增反响具有高度特异性和精确度，所以重复性好。

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